1983-жылы иштелип чыккан, ПКОнун жараяны аны аткарууга мүмкүндүк берди ДНК баскычтуу ырааттуулугун жана жеке ген нуклеотид тартибин аныктоо.
ыкмасы жылуулук жарыш же кайталап жылытуу жана ДНК эришине жана жупталуу ишке ашышы үчүн экөөсү пикирине муздатуу колдонот. ПКО уланып жатканда, "жаңы" ДНК геометриялык ДНК үлгүнү күчөткүч копияланышы жана чынжыр сезим, тканга кирүү үчүн шаблону болуп колдонулат.
ПКО ыкмалары Биотехнологиянын көп жерлерде, анын ичинде колдонулат белок инженердик , клондоштуруу, криминалистика (ДНК Fingerprinting), аталыкты аныктоо, тукум куучулук жана / же жугуштуу оорулардын диагноз, жана айлана-чөйрөнү коргоо үлгүлөрдү талдоо үчүн.
криминалистика, атап айтканда, ПКО бул ДНК далилдерди кичинекей суммасын күчөтүп, себеби, өзгөчө пайдалуу болот. ПКО ошондой эле тээ эзелтеден болгон ДНКны анализдөө үчүн колдонулат, жана бул техникалар дүйнөнүн ар кыл өлкөлөрүнөн келген өлүктөр үчүн 800000-жаштагы Маммот бардыгын аныктоо үчүн колдонулган болушу мүмкүн.
ПКО тартиби төмөнкүчө чагылдырууга болот:
- Демилгеленбей: Бул кадам ысык-башталышы УРК талап ДНК polymerases үчүн гана керек. жооп 94 жана 96 ° C арасында жагылгандыктан жана 1-9 мүнөт өттү.
- Солчуушкуннарындан: тартиби Initialization талап жок болсо, солчуушкуннарындан биринчи кадамы болуп саналат. жооп 94-98 ° С 20-30 секунд карарып кетти. ДНК калып суутек байланыштары бузулган жана бир-тыгылып ДНК молекулалары түзүлгөн турат.
- Annealing: жооп температурасы 50 жана 65 ° C ортосунда төмөнкү жана 20-40 секунд өткөрүлөт. грунттарды жалгыз калып ДНК Калып anneal. температурасы бул кадам учурунда өтө маанилүү болуп саналат. өтө ысык болсо, Primer байлап мүмкүн. өтө суук болсо, Primer туура эмес байлап мүмкүн. Primer катар тыгыз шаблон ырааттуулугун дал келгенде жакшы байланыш пайда болот.
- Түр / болунот: бул кадамга температурасы полимераз түрүнө жараша өзгөрөт. ДНК полимераз таптакыр жаңы ДНК тал синтезделет.
- Final узаруу: Бул кадам акыркы ПКО айлампасынын кийин 5-15 мүнөттүн ичинде 70-74 ° С жүзөгө ашырылат.
- Final кармап: Бул кадам милдеттүү болуп саналат. температурасы 4-15 ° C жана кабыл strops сакталат.
тартиби үч баскычка бөлүнөт:
- Көрсөткүчтүү ампер: ар бир айлампасынын ичинде, продукт (жасала турган ДНКнын өзгөчө бөлүгү) эки эсе болот.
- Түздөө-өчүрүү баскычы: ДНК полимераз ишин жоготот жана реагенттерди жалмап катары, буга басат.
- Plateau: продукт Бир дагы суммаланат.