Эмне ПКО ДНК тартибин жана күчөтүүчү гендерде менен байланыштуу
Режиминде ( ПКО ) бир гендин бир нече көчүрмөсүн алуу үчүн молекулярдык генетикалык ыкмасы болуп саналат, ошондой эле тукум жараянынын бир бөлүгү болуп саналат.
Кантип полимераз Chain жооп кайтаруу иш барбы?
Джин көчүрмөлөрү ДНК үлгүсүн колдонуу жана технология үлгүсүндөгү табылган гендин бир нускадан бир нече көчүрмөсүн жасоо үчүн жетиштүү жакшы жасалат. ПКО миллиондогон нускасын үчүн бир гендин ампер, айкындоо жана өлчөмү жана акысыз негизинде көрүү ыкмаларын колдонуу менен ген тизмектеринин аныктоого мүмкүндүк берет (+ же -) ДНКнын ача.
контролго шарттарында ДНК аз катмары деп аталган ДНКнын бир сындырым комплект deoxynucleotides (dNTPs) кошуп ДНК polymerases катары белгилүү энзимдер тарабынан түзүлгөн "калып." ДНК да кичинекей даана, "грунттарды" деп аталган полимераз үчүн негиз катары колдонулат. Грунттарды кичинекей адам түзгөн ДНК (oligomers) даана, адатта, 15 жана 30-нуклеотид ортосунда болуп саналат. Алар бойго жаткан ген учу-кыйырына кыска ДНК тизмектерин билип же айтпастан менен кабыл алынат. ПКОдо учурунда, пайдалуу тизмекке жаткан ДНК кызуу болуп саналат жана эки катар бөлөт. муздатуу кийин, грунттарды шаблон (аталган annealing) байлоо жана полимераз баштоо үчүн жай даярдабайт.
ПКО Technique
режиминде (УРК) thermophiles жана thermophilic полимераз энзим табылган (жогорку температурада жылытуу кийин түзүмдүк бүтүндүгүн жана милдеттерин сактоого энзимдердин) жардамы менен мүмкүн болду.
ПКО техника тартылган кадам болуп төмөнкүлөр саналат:
- А аралашмасы ДНК шаблону оптималдуу байытуу менен түзүлгөн, полимераз энзим, грунттарды, dNTPs. энзим жана бурмаланып кетпегендигин жок аралашмасын жылытууга жөндөмдүүлүгү 94 градус диапазонунда температурада ДНК үлгүсүн жуп чынжырлуу түзүлүшү жана бурмаланып кетпегендигин берет.
- солчуушкуннарындан кийин, үлгү иретинде бир-тыгылып ДНК үлгүлөрүн үчүн грунттарды боюнча annealing (милдеттүү) көмөктөшөт 54 градус, айланып, бир кыйла алгылыктуу чекте чейин муздайт.
- айлампасынын үчүнчү кадам, үлгү болунот үчүн 72 градус, Таркоола ДНК полимераз үчүн Идеалдуу температурада менен үйлөп, жатат. болунот учурунда ДНК полимераз бир тренипгдерди 3 "учу-кыйырына чейин кошумча dNTPs кошуу жана пайыздарды ген аймактагы эки абалда ДНКнын бир бөлүмүн түзүү үчүн шаблону болуп ДНК түп бир тал колдонот.
- так дал келүү эмес, ДНК тизмектеринин менен Сатурн бар грунттарды кызыкчылыктардын ген болунот чектөө, 72 градус Сатурн бойдон жок.
жана бурмаланып кетпегендигин, annealing жана болунот бул жараян аркылуу геометриялык аралашманын керектүү ген нускалардын санын көбөйтүү эселенип (30-40) жолу кайталанат, жатат. кол менен аткарылган болсо, бул жараян бир топ Уикипедияны да, үлгүлөр программалоочу Thermocycler даярдалган жана инкубатордук болот, көпчүлүк молекулярдык лабораторияларда азыр кадимки жана толук ПКО кабыл 3-4 саат ичинде жүргүзүлүшү мүмкүн.
Ар жана бурмаланып кетпегендигин кадам мурдагы айлампасынын узаруу жараянын токтотуп, натыйжада ДНКнын жаңы багытын truncating жана керектүү ген болжол өлчөмү, аны аткаргандар.
узаруу айлампасынын мөөнөтү пайыздарды ген өлчөмүнө жараша кыскартылган же узагыраак болушу мүмкүн, бирок бара-бара, ПКОнун кайталап айлануу аркылуу, шаблонла көпчүлүгү жалгыз кызыкчылык ген өлчөмү менен чектелген болот, ошондой эле алар грунттарды эки буюмдарды алынган болот.
Бир нече ар кандай бар ийгиликтүү ПКОдо үчүн себеп натыйжасын арттыруу үчүн бурмаланып калышы мүмкүн. ПКО буюмдун катышуусу үчүн сыноо үчүн абдан көп колдонулган ыкмасы болуп саналат агароза гел electrophoresis . Кайсы өлчөмү жана акысыз негизинде өзүнчө ДНК сыныктары үчүн колдонулат. сыныктарынан анда алышчу же Radioisotopes аркылуу көрсөтүлөт жатышат.
Evolution
ПКОнун ачылган болгондуктан, ДНК баштапкы Таркоола табылган башка polymerases. Алардын кээ бирлери жакшы, "текшерүү" жөндөмүнө ээ же жогорку температурада кыйла туруктуу болуп, бул ПКОдо өзгөчөлүктөрүн жакшыртуу жана туура эмес dNTP киргизүү тартып каталарын азайтуу.
ПКОнун айрым айырмачылыктар атайын колдонмолор үчүн атайын иштелип чыккан жана азыркы молекулалык-генетикалык лабораторияларда дайыма колдонулат берилди. Алардын айрымдары Айкын убакыт PCR жана Кайрылуу-транскриптазынын ПКО болуп саналат. ПКОнун ачылыш ДНКнын тартибин, анын өнүгүшүнө алып келген ДНК дактилоскопиядан жана башка молекулярдык ыкмалары.